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|本期目录/Table of Contents|

长QT综合征KCNQ1基因G983A突变体的构建、体外转录与表达(PDF)

《心脏杂志》[ISSN:1009-7236/CN:61-1268/R]

期数:
2008年第6期
页码:
673-677
栏目:
基础研究
出版日期:
2008-12-25

文章信息/Info

Title:
Construction, in vitro transcription and expression of KCNQ1 (G983A) gene mutant
作者:
李伟1; 杨钧国2; 杜戎2; 管思明1; 柯琴梅1; 王斌1; 徐秋梅1
华中科技大学同济医学院附属协和医院: 1.老年病科，2.心血管病研究所，湖北 武汉 430022
Author(s):
LI Wei1;  YANG Junguo2;  DU Rong2;  GUAN Siming1;  KE Qinmei1;  WANG Bin1;  XU Qiumei1
1.Department of Geriatrics, 2.Institute of Cardiology, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong Science and Technology University, Wuhan 430022, Hubei, China
关键词:
长QT综合征; KCNQ1基因; 突变体; 构建; 表达
Keywords:
long QT syndrome;  KCNQ1;  mutant;  construction;  expression
分类号:
Q343.1
DOI:
-
文献标识码:
A
摘要:
目的 构建先天性长QT综合征KCNQ1基因G983A突变体，并研究其在非洲爪蟾卵母细胞上的表达。方法 首先进行定点诱变，构建含KCNQ1 G983A突变点的原核表达载体pSP64KCNQ1(G983A)，并对pSP64KCNQ1(G983A)进行纯化和线性化，然后应用SP6 RNA体外转录试剂盒进行转录，并回收和鉴定转录的cRNAs。制备非洲爪蟾卵母细胞，经显微注射仪将KCNQ1(G983A)cRNAs注射至卵母细胞中，2 d后采用双电极电压钳记录卵母细胞膜的电流。结果 成功地构建pSP64KCNQ1(G983A)突变体，经转录获得KCNQ1(G983A)cRNAs，并在爪蟾卵母细胞上表达。 结论 KCNQ1基因(G983A)突变体的成功构建及表达，为进一步探讨长QT综合征的发病机制奠定了基础。
Abstract:
AIM To construct the vector of KCNQ1 G983A mutation and to investigate its expression in Xenopus laevis oocytes. METHODS Sitedirected mutagenesis of LQTS gene KCNQ1 was made by PCR. pSP64KCNQ1 (G983A) was purified and linearized by digestion, and cRNAs were then prepared with SP6 RNA polymerase. cRNAs were injected to Xenopus laevis oocytes by microinjectors. Two days later, the membrane currents of oocytes were recorded by dualmicroelectrode voltageclamp technique. RESULTS The mutation site in pSP64KCNQ1 (G983A) was correctly established and pSP64KCNQ1 (G983A) was transcribed in vitro and expressed in Xenopus laevis oocytes successfully. CONCLUSION The successful construction and expression of KCNQ1 G983A lay the foundation for further study on the mechanism of long QT syndrome.

参考文献/References

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［6］ Moss AJ, Shimizu W, Wilde AA, et al. Clinical aspects of type1 longQT syndrome by location, coding type, and biophysical function of mutations involving the KCNQ1 gene［J］. Circulation, 2007, 115(19):2481-2489.

［7］ 张晓东,臧益民,谢安. 用于离子通道基因表达的爪蟾卵母细胞的分离和培养［J］. 心脏杂志, 2001, 13(2):120-122.

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2007-05-09.基金项目：国家自然科学基金项目资助(30170377)和国家 科技攻关计划(863)项目资助(2002BA711A07) 通讯作者：杨钧国，主任医师，教授，主要从事心血管遗传病 的分子机制研究Email:yjg.email@yahoo.com.cn 作者简介：李伟，主治医师，博士Email:doclw@163.com
更新日期/Last Update: 2009-03-24